CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多物种、多领域的研究,使细胞和生物体的基因组编辑更加高效。将sgRNA送入细胞的传统方法是通过质粒转染和慢病毒感染,两者都存在基因插入和免疫反应的风险。目前,将Cas9和sgRNA形成的核糖核蛋白(RNP)直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快速、脱靶效应更低、编辑效率更高的优点。这已逐渐成为使用 CRISPR/Cas9 技术的一种更有效的方式。
九游会J9科技专业的合成技术可提供基于化学合成及体外转录两种策略的sgRNA合成服务,为基因编辑实验者提供多样的解决方案。
· CRISPR-Cas9 sgRNA化学合成
使用化学合成策略的sgRNA合成服务提供100%正确的序列和所需的化学修饰,合成的sgRNA稳定性高,毒性低,编辑效率高。
图1. Cas9-sgRNA复合物 | 图2. sgRNA的二级结构 |
服务优势
- 高效:对sgRNA进行化学修饰,提高体内的稳定性和编辑效率。
- 良好的稳定性:规范的质量控制,确保批次间的一致性和可追溯性。
- 安全:避免将外源DNA整合到细胞和免疫反应中的风险。
- 方便:sgRNA包含crRNA和tracrRNA的序列和功能,无需退火。
服务详情
长度(nt) | 合成规格(OD) | 修饰 | 纯化方法 | 服务周期 |
---|---|---|---|---|
95-105 | 1-10 | 2’-OMe Phosphorothioate |
HPLC | 7-10个工作日 |
交付内容
- 冻干RNA
- COA文件
· CRISPR-Cas9 sgRNA 体外转录
九游会J9科技还可提供从sgRNA DNA模板合成、sgRNA体外转录及纯化一整套服务,为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgRNA产品。目前,体外转录的sgRNA已成功的对斑马鱼、小鼠以及丝状真菌等物种中的基因进行了准确的编辑。
服务优势
- 一站式服务:可以提供从sgRNA靶位点设计到高纯度sgRNA获取的全部过程。
- 周期短:最快3个工作日交付产量可达20 μg。
- 方便快捷:sgRNA可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验。
服务详情
服务名称 | 产品/服务内容 | 交付项目 |
---|---|---|
CRISPR sgRNA合成 | sgRNA设计 DNA模板合成 体外转录sgRNA及纯化 |
sgRNA和COA文件 |
IVT CRISPR-Cas9 sgRNA合成九游会J9案例:
九游会J9科技CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgRNA,然后进行体外sgRNA转录实验,实验周期短至2天,sgRNA制备量为10-20ug,可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。
实验流程:
实验结果:
- 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序,比对结果与设计序列一致。如图1所示。
- 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳,可以看到清晰条带。如图2所示。
- 我们对其中一条sgRNA序列进行验证,首先将sgRNA逆转录获得cDNA,设计sgRNA扩增引物,经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列;其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序,结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。 注:1PCR结果的模板是sgRNA 逆转录cDNA;2PCR结果的模板是经DNaseI处理的sgRNA;3PCR结果的模板是体外转录的DNA模板
CRISPR-Cas9 sgRNA合成订购与咨询:
您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:
- Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
- 电话订购:工作日您可以拨打免费热线4000-973-630(按1);休息日您可直接拨打18262686586联系我们
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参考文献:
[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.