CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多物种、多领域的研究，使细胞和生物体的基因组编辑更加高效。将sgRNA送入细胞的传统方法是通过质粒转染和慢病毒感染，两者都存在基因插入和免疫反应的风险。目前，将Cas9和sgRNA形成的核糖核蛋白（RNP）直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快速、脱靶效应更低、编辑效率更高的优点。这已逐渐成为使用 CRISPR/Cas9 技术的一种更有效的方式。

九游会J9科技专业的合成技术可提供基于化学合成及体外转录两种策略的sgRNA合成服务，为基因编辑实验者提供多样的解决方案。

· CRISPR-Cas9 sgRNA化学合成

使用化学合成策略的sgRNA合成服务提供100%正确的序列和所需的化学修饰，合成的sgRNA稳定性高，毒性低，编辑效率高。

图1. Cas9-sgRNA复合物 图2. sgRNA的二级结构


服务优势

  1. 高效：对sgRNA进行化学修饰，提高体内的稳定性和编辑效率。
  2. 良好的稳定性：规范的质量控制，确保批次间的一致性和可追溯性。
  3. 安全：避免将外源DNA整合到细胞和免疫反应中的风险。
  4. 方便：sgRNA包含crRNA和tracrRNA的序列和功能，无需退火。

服务详情

长度（nt） 合成规格（OD） 修饰 纯化方法 服务周期
95-105 1-10 2’-OMe
Phosphorothioate		 HPLC 7-10个工作日

交付内容

  1. 冻干RNA
  2. COA文件

· CRISPR-Cas9 sgRNA 体外转录

九游会J9科技还可提供从sgRNA DNA模板合成、sgRNA体外转录及纯化一整套服务，为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgRNA产品。目前，体外转录的sgRNA已成功的对斑马鱼、小鼠以及丝状真菌等物种中的基因进行了准确的编辑。

服务优势

  1. 一站式服务：可以提供从sgRNA靶位点设计到高纯度sgRNA获取的全部过程。
  2. 周期短：最快3个工作日交付产量可达20 μg。
  3. 方便快捷：sgRNA可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验。

服务详情

服务名称 产品/服务内容 交付项目
CRISPR sgRNA合成 sgRNA设计
DNA模板合成
体外转录sgRNA及纯化		 sgRNA和COA文件

IVT CRISPR-Cas9 sgRNA合成九游会J9案例：

九游会J9科技CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgRNA，然后进行体外sgRNA转录实验，实验周期短至2天，sgRNA制备量为10-20ug，可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。

实验流程：

一步法合成gRNA DNA模板

一步法合成gRNA DNA模板

grna-dna

实验结果：

  1. 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序，比对结果与设计序列一致。如图1所示。
    2. 图1.平连结果与设计序列比对图

    图1.平连结果与设计序列比对图

  2. 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳，可以看到清晰条带。如图2所示。
    3. 图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

    图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

  3. 我们对其中一条sgRNA序列进行验证，首先将sgRNA逆转录获得cDNA，设计sgRNA扩增引物，经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列；其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序，结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。
    4. 图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    注：1PCR结果的模板是sgRNA 逆转录cDNA；2PCR结果的模板是经DNaseI处理的sgRNA；3PCR结果的模板是体外转录的DNA模板

CRISPR-Cas9 sgRNA合成订购与咨询：
您可以通过以下任意方式下单或咨询，工作时间我们保证在1小时内给您反馈：

  1. Email：请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话订购：工作日您可以拨打免费热线4000-973-630（按1）；休息日您可直接拨打18262686586联系我们
  3. 在线咨询：您有任何技术问题均可与我们进行网页在线互动

参考文献：

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.